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血氨

基本信息

  • 专科分类: 消化
  • 检查分类: 肝功能检查
  • 适用性别: 男女均适用
  • 是否空腹:  空腹
  • 手术参考价: 20元
  • 科 室: 消化

血氨检查简介

人体内的氨是蛋白质代谢过程中通过氨基酸脱氨基,肾脏使谷氨酰胺分解和肠道内细菌的作用而生成。大部分氨在肝内通过鸟氨酸循环合成尿素。一部分被用于酮酸的氨基化,合成谷氨酰胺,在肾内形成铵盐从尿中排出。血氨在诊断治疗肝昏迷、肝性脑病中占重要地位,尿中氨测定是估价体内酸碱平衡紊乱的指标之一,血氨的测定方法有离子交换树脂法、直接法、电极法及酶法,其中酶法以其简单、特异性高而被广泛应用。

血氨检查过程

取材:血液

血氨的测定原理:血浆氨的酶法测定基于下列反应:

在过量α-酮戊二酸、NAD(P)H和足量谷氨酸脱氢脱氢酶(GLDH)条件下,酶促反应的速率,即NAD(P)H转变成NAD(P)+使340nm吸光度的下降速率与反应体系中氨的浓度呈正比关系。

试剂:全部试剂必须用去氨水制备。去氨水用蒸馏水经氢型阳离子交换树脂处理获得。

(1)66.7mmol/LKH2PO4溶液:取9.12gKH2PO4溶入去氨水中,定溶到1L,4℃保存。

(2)66.7mmol/LNa2HPO4溶液:取9.51gNa2HPO4溶解并加去氨水到1L,4℃保存。

(3)pH8.0(±0.05),66.7mmol/L磷酸盐缓冲液(PB):取5ml“1”液及95ml“2”液,混合,4℃保存,稳定3周。

(4)310mmol/Lα-酮戊二酸:取0.45gα-酮戊二酸,溶于5ml去氨水中,用3mol/L氢氧化钠调pH至接近5.0时,改用0.1mol/L氢氧化钠调pH至6.8(±0.01),切勿调得过碱,因高pH可破坏α-酮戊二酸,以去氨水稀释到10ml,4℃稳定10天;

(5)NADPH贮存液:称约10mgN-ADPH(-20℃、干燥器保存)溶于1mlPB中取出50μl,以PB稀释到5ml为工作液,以PB调零,1cm光径,在340nm波长读NADPH工作液的吸光度,计算NADPH贮存液中实际浓度:

6.22为NADPH的毫摩尔吸光系数,据上式计算结果确定制备GLDH工作液中加入NADPH贮存液的量,使达到149μmol/L。

(6)GLDH工作液:根据GLDH酶制品(-20℃干燥器中保存)的比活,称出酶活力为992U的相应量(如比活为50U/mg蛋白,则称20mg),如GLDH在甘油中,可按U/ml吸出992U的相应体积,置50ml量瓶中,称入ADP(-20℃,干燥器中保存)15mg,吸入计算量的NADPH贮存液,以PB稀释到50ml,4℃保存可稳定7天;

(7)氨标准贮存液,100mmol/L:称取(NH4)2SO4660.7mg,溶于去氨水定容到100ml,4℃保存;

(8)氨标准应用液:用去氨水分别稀释贮存液成25、50、100、及150μmol/L。

操作方法:所用分光光度计需配有37℃恒温比色系统及340nm波长。如用自动分析仪,可根据本法反应条件自行设计,样品及试剂用量按比例减少。操作见表1,按B、S、U管先后顺序进行。

混匀,于10s时读A10s于70s时读A70s,求各管的△A,即△A=A10s-A70s。

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