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血清谷丙转氨酶

基本信息

  • 专科分类: 消化
  • 检查分类: 肝功能检查
  • 适用性别: 男女均适用
  • 是否空腹:  空腹
  • 手术参考价: 15元
  • 科 室: 消化

血清谷丙转氨酶检查简介

丙氨酸氨基转移酶(ALT)是通常所称谷丙转氨酶(CPT),存在于各组织细胞,以肝脏含量最多,其次是心肌细胞内,血清中酶活性很低。当这些组织病变,细胞坏死或通透性增强时,细胞内酶释放入血,使血清中ALT活性增高。血清ALT测定主要用于肝脏病的诊断。

血清谷丙转氨酶检查过程

取材:血液

血清谷丙转氨酶的测定原理:

(1)比色法测定:ALT催化基质中的丙氨酸和α-酮戊二酸反应,生成谷氨酸和丙酮酸,后者与2,4-二硝基苯肼作用,生成苯腙,在碱性条件下显色。

(2)连续监测法:在ALT催化的反应中生成的丙酮酸,被LDH还原成乳酸,并使NADH氧化成NAD+,在340nm波长下吸光度降低,NADH的氧化速率与ALT活力成正比。

试剂:

(1)比色法测定:

①0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)。

A液:称磷酸二氢钾13.6g,溶于水中,加水至1000ml,冰箱保存。

B液:称磷酸氢二钠(含两个结晶水)17.6g,溶于水中,并加水至1000ml,冰箱保存。

取A液80ml,B液420ml混合,置冰箱内保存即可。

②ALT基质液:精确称取DL-丙氨酸1.79g和α-酮戊二酸29.2mg,溶于50ml磷酸盐缓冲液中,用1mol/LNaOH溶液(约0.5ml)校正pH7.4,再加磷酸盐缓冲液至100ml,可稳定2周。加麝香草酚90mg,可延长使用时间。

③1mol/L2,4-二硝基苯肼(DNPH)溶液:称取DNPH19.8mg,溶于1000ml1mol/LHCl中,置室温保存。

④0.4mol/LNaOH溶液:溶解16.0gNaOH于水中,并加至1000ml,置带塞塑料瓶内,置室温保存。

⑤2mmol/L丙酮酸标准液:可购买或自配。准确称取22.0mg丙酮酸钠(AR),置于100ml容量瓶中,加0.05mol/L硫酸至刻度。

(2)连续监测法:

①基质液的成分和浓度(IFCC):100mmol/LTris缓冲液(pH7.5),15mmol/Lα-酮戊二酸,500mmol/LL-丙氨酸,0.18mmol/LNADH,0.1mmol/L磷酸吡哆醛,1200U/L乳酸脱氢酶。

②市售试剂盒:按说明书用蒸馏水或稀释液溶解,用后置冰箱保存,一般可稳定4天。

操作方法:

(1)比色法测定:其基质液37℃预温,按表1操作。

混匀,置37%水浴20min,各管加0.4mol/LNaOH溶液5ml,混匀,置室温5min后,在505nm处用对照管调零点,读取各管吸光度,查标准曲线即得ALT活力单位。

(2)连续监测法:各实验室可根据本室的分析仪型号及操作说明书而定。主要参数:340nm波长,37℃,样本与试剂体积比为1∶10。

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