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血管性假血友病因子

基本信息

  • 专科分类:
  • 检查分类: 血液检查
  • 适用性别: 男女均适用
  • 是否空腹:  空腹
  • 手术参考价: 55元
  • 科 室:

血管性假血友病因子检查简介

用因子Ⅷ相关抗原(ⅧR∶Ag)单种抗血清与琼脂混合制成薄板,加入一定量的受检血浆(抗原),通电后,在电声作用下形成特异的火箭样免疫沉淀峰,此峰的高度与抗原浓度成正比。

血管性假血友病因子检查过程

取材:血液

血管性假血友病因子的测定原理:在含抗血管性血友病因子相关抗原(VWF∶Ag)抗体的琼脂板中,加入一定量的受检血浆(抗原),在电场作用下,定量的抗原在含定量抗体的琼脂中泳动。在一定的时间内出现抗原抗体反应所形成的火箭样沉淀峰,该峰的高度与抗原浓度成正比,以此可以计算VWF∶Ag的量。此法为Laurell免疫火箭电泳法。

试剂:

(1)三羟甲基氨基甲烷(Tris)-巴比妥缓冲液(pH值8.8):巴比妥钠4.88g,巴比妥1.235g,Tris2.890g,加水至1L。

(2)9g/L琼脂糖:琼脂糖0.9g,Tris-巴比妥缓冲液100ml。将琼脂糖置于Tris-巴比妥缓冲液中,加热溶解,乘热用薄层棉花过滤后使用。

(3)血清:兔抗人VWF∶Ag抗血清。

(4)4.4mmol/L磷钼酸溶液:磷钼酸10g,加水至1L,溶解后用滤纸过滤使用。

(5)有机玻璃框:框内径8cm×8cm,厚1.5mm。

操作方法:

(1)取一定量VWF∶Ag抗血清,用三羟甲基氨基甲烷-巴比妥缓冲液稀释10倍,另取5g/L琼脂糖三羟甲基氨基甲烷-巴比妥缓冲液隔水融化,冷却至56℃。然后将预温至56℃的稀释VWF∶Ag抗血清1∶60混合(视抗体效价而定),制成8cm×8cm、厚1.5mm的琼脂板,距玻板一边约2cm处打一排小孔,径孔3mm,孔间距为5mm。

(2)将琼脂板置于电泳槽内,孔朝阴极,用滤纸作盐桥,用定量注射器吸取原血浆1∶2、1∶4、1∶8、1∶16等不同倍数稀释的健康人血浆各10μl,分别加入抗体琼脂板小孔里。待检血浆样品用Tris-巴比妥缓冲稀释1倍后,加入各样品孔内。每孔加量均为10μl。

(3)电泳条件:电泳110~150V,电流约5mA/块板,时间18h,温度低于15℃。

(4)电泳完毕,取出凝胶板浸于4.4mmol/L磷钼酸染色液中20min以上,然后再放入生理盐水中浸泡10min,即可见明显火箭状沉淀峰,也可用氨基黑按常规方法染色。

(5)染色后,用双分规测量火箭电泳峰的高度(从加样孔上缘到峰顶),将标准血浆5个读数,通过回归方程得出标准曲线,然后求出各测定样品VWF∶Ag的含量,再乘以稀释倍数(×2),即样品实际浓度。表示相当于正常血浆的百分率。

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